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原理:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA 。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达 。过程:在逆转录酶作用下以dNTP为底物,RNA为模板,tRNA为引物 。
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按5′→3′方向,合成一条与RNA模板互补的DNA单链 。然后它与RNA模板形成RNA DNA杂交体,随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以此DNA为模板合成第二条DNA 。逆转录过程是病毒的复制形式之一,如RNA病毒中的逆转录病毒,DNA病毒中的嗜肝DNA病毒和花椰菜花叶病病毒的复制均需要经过逆转录 。
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逆转录过程在真核细胞中也同样存在,例如逆转座子和端粒DNA的延长均存在逆转录过程,需逆转录酶的催化 。逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现,是对中心法则的重要修正和补充 。
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【逆转录的原理及主要过程 逆转录的基本过程】人们通过体外模拟该过程,以样本中提取的mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成出互补的cDNA,构建cDNA文库,并从中筛选特异的目的基因 。该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一 。
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